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Plateforme d’imagerie Cellulaire et Tissulaire du Pavillon Pasteur PICT-IBiSA@Pasteur
Keywords :
déconvolution, structures et dynamiques nucléaires, Microscopie à champ large, microscopie confocale à disque rotatif, imagerie de cellules vivantes
Responsable : Dr Patricia Le Baccon
La plate forme d’imagerie Cellulaire et Tissulaire (PICT) de l’Institut Curie permet aux chercheurs d’étudier leurs échantillons en microscopie électronique et photonique. La microscopie photonique est devenue une méthode incontournable pour les biologistes ces dernières années. Les progrès de la microscopie et en parallèle la mise au point de fluorophores performants (Alexas, protéines fluorescentes…) ont permis d’imager les cellules en trois dimensions avec plusieurs couleurs et surtout au cours du temps avec l’avènement de la GFP.
Figure 1 : Embryon de souris stade 8 cellules – L’ADN est coloré en bleu (DAPI) et un ARN en vert.
La composante photonique de la plate forme est divisée en 4 entités réparties sur 4 sites géographiques : PICT@Orsay pour l’Institut Curie à Orsay ; à Paris ; PICT-IBiSA@BDD pour le bâtiment de la biologie du développement, PITC-IBiSA@Lhomond pour le bâtiment Constant Burg, et PITC-IBiSA@Pasteur pour le pavillon Pasteur. Depuis 2006, la plate forme PICT-IBiSA de l’Institut Curie est ouverte aux laboratoires extérieurs.
Le pavillon Pasteur sur le site de Paris héberge la plate-forme de microscopie quatre et cinq dimensions (4-5 D) de l’Institut Curie. La plate forme est équipée de trois systèmes dédiés à l’imagerie sur cellules fixées et sur cellules vivantes avec régulation de la température et du pourcentage de CO2 disponible sur les trois systèmes. Deux de ces microscopes sont des vidéo microscopes à champ large (4-5D et Delta Vision), le troisième est un microscope confocal à disque rotatif (spinning disc Andor).
Figure 2 : Levures vivantes doublement marquées par la GFP (vert – marque les télomères) et la mCherry (rouge – marque le nucléole)
La plate forme met également à disposition des stations de travail pour l’analyse et le traitement des images acquises avec nos systèmes. Les stations de travail sont équipées d’outils pour la déconvolution (Applid Precision, Metamorph), le débruitage (par ondellettes – MIA, par patch –ND Saphir), la reconstruction en trois dimensions (Image J, Amira)…
Figure 3 : Noyau de cellule de souris avant (gauche) et après déconvolution (droite). Les signaux sont plus résolus et constrasté après déconvolution.
Pour accéder aux systèmes de la plate forme toute personne doit être formée. Pour cela un rendez-vous doit être fixé avec le responsable de la plate forme (lebaccon@curie.fr). Après acceptation de la charte d’accès à la plate forme et la formation l’utilisateur a accès aux systèmes et à la réservation en ligne (http://materiels.curie.fr/reservations/).